熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具,由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。熒光顯微鏡利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光,通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。
熒光顯微鏡多采用200W的超高壓汞燈作光源,它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內(nèi)充一定數(shù)量的汞,工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電,引起水銀蒸發(fā),球內(nèi)氣壓迅速升高,當(dāng)水銀*蒸發(fā)時(shí),可達(dá)50~70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力,這一過程一般約需5~15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光,足以激發(fā)各類熒光物質(zhì),因此,為熒光顯微鏡普遍采用。超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此,燈室必須有良好的散熱條件,工作環(huán)境溫度不宜太高。
超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃,使用一些時(shí)間后,則需要高壓?jiǎn)?dòng)(約為15000V),啟動(dòng)后,維持工作電壓一般為50~60V,工作電流約4A左右。200W超高壓汞燈的平均壽命,在每次使用2h的情況下約為200h,開動(dòng)一次工作時(shí)間愈短,則壽命愈短,如開一次只工作20min,則壽命降低50%。
因此,使用熒光顯微鏡時(shí)盡量減少啟動(dòng)次數(shù)。燈泡在使用過程中,其光效是逐漸降低的。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動(dòng)。點(diǎn)燃燈泡后不可立即關(guān)閉,以免水銀蒸發(fā)不*而損壞電極,一般需要等15min。由于超高壓汞燈壓力很高,紫外線強(qiáng)烈,因此燈泡必須置燈室中方可點(diǎn)燃,以免傷害眼睛和發(fā)生爆炸時(shí)造成操作者受傷。