圖 2。 概括了對含有多種熒光染料的樣本成像時的三種顏色分離方法。 通過比較發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)熒光成像方法相比，F(xiàn)luoSync 采集速度更快的優(yōu)勢顯而易見。FluoSync 捕捉受激發(fā)染料的全發(fā)射光譜，因此光子不會被浪費，這使它成為敏感活體樣本弱光成像的理想探測技術(shù)。
圖 3。 左側(cè)所示為藍(lán)色、綠色和紅色熒光團(tuán)的三個單獨光譜。 使用相量分析時，每個純光譜都落入相量空間中的特定空間，顏色在一個圓圈上表示，信號清晰度決定了與中心（中間面板）的距離。 這些熒光團(tuán)的任意組合也將落入特定空間。 圖中所示是三個熒光團(tuán)中的每一個與所有三個熒光團(tuán)的混合體的一種組合。 由于任何可能的熒光團(tuán)組合也將落入“它們的"空間，因此可將光譜平均化以實現(xiàn)去噪。 右側(cè)圖是一個例子，其中黑線表示平均值 ± 誤差（顯示為灰色區(qū)域）。 降噪光譜表示所有貢獻(xiàn)熒光團(tuán)的總和，它很好地填充了曲線下方的面積通過相量來表示光譜信息，可對圖像中的不同熒光組分進(jìn)行實時、半盲的光譜分解。這種表示方法不僅局限于熒光標(biāo)記，還可以去除自發(fā)熒光等無用信號，因此比線性拆分更加可靠?；谙嗔康墓庾V拆分方法適合用于分解最多 3 個熒光團(tuán)的信號。超過 3 個熒光團(tuán)時，相量方法仍然可以輕松識別最大的影響因素。拆分領(lǐng)域的新發(fā)展催生了一種混合拆分方法，它結(jié)合了基于相量的拆分和線性拆分這兩種方法的優(yōu)點。
對混合光譜拆分的說明
FluoSync 充分利用了基于相量的拆分與線性拆分混合方法的優(yōu)勢。相量分析用于相似光譜的快速聚類以及光譜去噪和線性拆分，能夠識別染料對每個聚類的單獨貢獻(xiàn)，甚至包括超過 3 種染料的情況（圖3）。與單純基于相量的拆分類似，具有相似熒光組分的所有像素都會落入相同的相量空間。因此，無論空間位置（即圖像中的原點位置）如何，它們都可被平均化以實現(xiàn)光譜去噪。 這樣，通過歧管進(jìn)行的線性拆分操作次數(shù)（像素數(shù)，通常在百萬像素級別）通常會減到少于100,000次操作。然后對降噪光譜進(jìn)行線性拆分，由此識別每種染料的亮度值。與線性方法相比，混合拆分方法利用了基于相量的方法所具有的速度和平均化優(yōu)勢，而不會影響可分離染料的數(shù)量。
總結(jié)與優(yōu)勢
FluoSync是光學(xué)濾色鏡的數(shù)字迭代進(jìn)步。這是一種可用于對多種染料成像的可靠方法。由于它只需要單次圖像曝光，并且可以使用自動光譜分解方法完成，因此可以更輕松、更快速地進(jìn)行多色熒光成像。
與傳統(tǒng)成像技術(shù)相比，F(xiàn)luoSync 提供了高速、同步的多通道采集，同時利用了串?dāng)_而不是避免串?dāng)_。它是掃描大型樣本或捕捉活細(xì)胞快速動態(tài)過程的理想解決方案。最后，使用 FluoSync 時無需在實驗之間管理多組熒光濾色塊，從而簡化了實驗工作流程。因此，您可以專注于獲得結(jié)果，而不是研究顯微鏡。
優(yōu)勢：
> 可使用不同的熒光團(tuán)組合更加自由地進(jìn)行多通道成像：您不再受限于使用與顯微鏡的固定濾光鏡組匹配的染料組合。
> 提升數(shù)據(jù)生成效率： 能同時采集所有事件而無需管理多組濾光鏡，從而加快了圖像采集過程，提高了對多孔板等大型樣本成像的效率，并且能夠捕捉活體樣本中的快
速事件。
> 增強信心：使用混合光譜拆分方法意味著您無需再擔(dān)心串?dāng)_。
參考資料
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